細(xì)胞分選試劑盒的核心目標(biāo)是從混合細(xì)胞群體中高效、特異地分離目標(biāo)細(xì)胞,其主流技術(shù)主要基于磁珠分選法(如MACS技術(shù))或熒光激活細(xì)胞分選法(FACS)。今天詳細(xì)介紹一下MACS:
一、MACS核心原理
利用抗體-磁珠復(fù)合物特異性結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞表面標(biāo)志物,通過磁場(chǎng)吸附實(shí)現(xiàn)分離。
二、MACS分選流程
1.標(biāo)記磁珠:
試劑盒提供預(yù)先偶聯(lián)特異性抗體(如抗CD4、CD19)的磁性微珠。
將磁珠與細(xì)胞懸液混合,磁珠通過抗體與目標(biāo)細(xì)胞表面抗原結(jié)合。
2.磁場(chǎng)分離:
將混合液置于磁力架(如Miltenyi的MACSiMAG分離器)中,磁場(chǎng)吸附磁珠標(biāo)記的細(xì)胞。
未標(biāo)記的細(xì)胞(非目標(biāo)細(xì)胞)保留在溶液中,通過傾倒或吸棄去除。
3. 收集目標(biāo)細(xì)胞:
移除磁場(chǎng)后,用緩沖液洗脫磁珠標(biāo)記的細(xì)胞,獲得高純度目標(biāo)群體。
三、MACS分選模式
正選(Positive Selection):直接標(biāo)記并分離目標(biāo)細(xì)胞(如CD4+ T細(xì)胞)。
負(fù)選(Negative Selection):標(biāo)記并去除非目標(biāo)細(xì)胞,剩余未標(biāo)記的即為目標(biāo)細(xì)胞(如未成熟的造血干細(xì)胞)。
四、MACS優(yōu)勢(shì)
無需復(fù)雜儀器,操作簡(jiǎn)單快速(約30分鐘)。
細(xì)胞活性高(>90%),適合后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)(如培養(yǎng)、移植)。
五、應(yīng)用場(chǎng)景
免疫學(xué)研究:分離T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等亞群。
腫瘤治療:分選CAR-T細(xì)胞或腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TILs)。
干細(xì)胞研究:富集造血干細(xì)胞或間充質(zhì)干細(xì)胞。
六、注意事項(xiàng)
抗體選擇:需驗(yàn)證抗體與目標(biāo)物種及細(xì)胞類型的兼容性。
細(xì)胞活性:避免長(zhǎng)時(shí)間孵育或劇烈離心損傷細(xì)胞。
交叉污染:分選前過濾細(xì)胞懸液(如40 μm濾網(wǎng))去除團(tuán)塊。
七、總結(jié)
細(xì)胞分選試劑盒通過特異性標(biāo)記與物理分離技術(shù)(磁場(chǎng)或熒光信號(hào))的結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的高效純化。磁珠法適合快速、低成本的分選需求,而FACS法則在復(fù)雜多標(biāo)志物分選中更具優(yōu)勢(shì),兩者共同推動(dòng)了基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的進(jìn)展。
